Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次显现消失去甲自身免疫到显现消失1改进型肾病临床研究腹泻的令人满意率在婴幼儿时期就有较好的叙述，多个去甲自身免疫HIV的婴幼儿之中曾70%在血液匹配后10年底肺结核反应肾病，而随访15年的婴幼儿这一比率缩减到84%。相较之下，占去临床研究1改进型肾病一半以上的改进型1改进型肾病的发作机制还没有给与确实的分析。

越来越多的人开始常用分期系统来界定1改进型肾病的令人满意：个躯在显现消失多种去甲自身免疫时踏入第1收尾，显现消失体温精神状态时踏入第2收尾，显现消失腹泻时踏入第3收尾。一些多发去甲自身免疫HIV的个躯，在1期和2期，令人满意很很慢，并拓展为发作的1改进型肾病。我们以前叙述了一分组在首次检查到多种去甲自身免疫试样后至来得少10年无肾病的极很慢令人满意者，这分组病变次数来得少，但构造非常明确。随后，我们发掘显现出去甲自身蛋白特异性CD8+T细胞会质侄化在令人满意加速的病变之中基本不依赖于，但在近期发作和仍然依赖于的肾病病变之中很容易检查到。这有可能表明，与令人满意病变相较，这些病变自身免疫质侄化的调节减慢。

早期分析表明，尽管调节性T细胞会(Treg)量情况下，但肾病病变依赖于一些机制缺陷，其之中以外对IL-2的质侄化意志力减低。此外，肾病病变之中的不稳定性CD4+T细胞会有可能对调节突显抵抗性，观感为不稳定性T细胞会的依赖性减弱，自然显现出的Treg和躯内显现出的可借Treg，以及蛋白境况的CD4+T细胞会之中IL-2质侄化减弱。本分析的目的是叙述了CD4+调节性T细胞会(Treg)在群集极加速令人满意者之中的构造，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

工具：BOX分析是一项以人群为基础的斜向分析，在21岁以下发作的病变侄女之中检查1改进型肾病的生命危险因素。我们以前叙述了仍然加速令人满意者的构造，他们持续保持多重去甲自身免疫HIV少于10年，但没有显现消失肾病的临床研究腹泻，很慢性或非顺利癫痫自身免疫。随后，10名在此期间持续保持无肾病并不想提供大量肾脏试样的加速令人满意者纳入T和B细胞会机制分析方法。在现有的分析之中，8名很慢令人满意者(SP分组)，之中位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的去甲自身免疫HIV。所有的组织者都处于1改进型肾病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身免疫对某些蛋白的HIV质侄化，然而，一名病变已经处于2期至来得少6年，但没有显现消失临床研究腹泻，一名病变被临床研究为肾病，该病患72岁，在野外实验试样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法之中对该小分侄顺利进行了另行分析方法报告。分开外周血单个核反应细胞会(PBMCs)，采用多表达式流式细胞会法术和T细胞会依赖性试验分析方法报告小分侄之中Treg的基频、表改进型和机制。常用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、比如说和回归)顺利进行无监督聚类分析方法，分析方法报告Treg表改进型。

结果：与肥胖小分侄相较，来自很慢令人满意躯的清醒CD4+T细胞会的监督聚类标示显现出，启动时的清醒CD4+ Treg基频缩减，与免疫抑制可借的TNFR相关蛋白(GITR)理解缩减有关。一名HbA1c增大的病变与令人满意加速者和反之亦然的相比较分组相较，Treg明人相同。机制分析方法表明，与肥胖小分侄相较，来自加速令人满意躯的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞会依赖性突显现出受损。观感为对不稳定性CD4+T细胞会CD25和CD134理解的依赖性缩减。

由此可知1 深入的表改进型分析方法标示显现出，CD4+Treg亚改进型在很慢令人满意队列之中缩减。由FlowSOM生成的Treg三楼，聚集在来自所有小分侄的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标示物理解认定显现出10个元簇:清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)常用9个有所不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个链表均是由一个战斗群(100个战斗群)，大得多的元战斗群(10个元战斗群)在链表分组外面上色。每个链表之中的面包由此可知坚称单个标示的理解级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以标示显现出整躯标示理解。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成由此可知，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较丰度为每个metacluster装有新线由此可知(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞会(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞会(l)。橘色白点均是由捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检查和。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 常用CITRUS的预测模改进型证实，Treg基频的缩减是令人满意加速的图案。基准旁路(a - f)和柑橘分析方法(g-k)比较SP组织者和反之亦然的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的均是由性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利进行分开，模拟FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及小分侄SP 606(橘色)之中CD25+ cd127的基频汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路闭包的装有新线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)柑橘簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解准确度着色，圆圈突显现出的簇被识别系统为SP和HD队列两者之间的有所不同。(j)装有新线由此可知标示显现出了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组之中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相较丰度(比率)。(k)直方由此可知标示显现出每个簇的表改进型(橙色)和Treg标示相较理解与氛围理解(橙色);上列，线程Treg_3;下面一行，线程Treg_4。氛围与所有其他簇之中标示的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检查和

由此可知3 与肥胖献血者相较，令人满意加速者清醒treg的GITR缩减。每个清醒CD4+T细胞会元簇(清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个理解标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热由此可知(sp606不以外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇之中所有HD(黄色)、所有SP(橙色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR理解串联，标示显现出直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon匹配符号秩和检查和，p< 0.07(橘色)所有小分侄以外，p< 0.05(橙色)小分侄SP 606和反之亦然的HD不以外在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR理解，从基准旁路，从所有HD(黄色)、所有SP(橙色)和SP 606(橘色)串联，标示显现出直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配符号秩检查和

由此可知4 来自加速令人满意的CD4+ treg细胞会支配不稳定性CD4+T细胞会的意志力减低。SP分组用橙色的新线和白点坚称，HD分组用金色的新线和白点坚称，橘色的新线/白点坚称小分侄sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被标示为CFSE, Treg按观察的比率起始。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，指导3天后顺利进行流式细胞会法术检查。(a-d)与CD4+接收者者相较应的treg指导(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者指导。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE依赖性多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性多于。常用HIV相比较(启动时的鼓动细胞会内含treg)计算出来依赖性多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 不稳定性CD4+T细胞会对加速令人满意的T细胞会转化的依赖性来得引人注意。SP分组用橙色的新线和白点坚称，HD分组用金色的新线和白点坚称，橘色的新线/白点坚称小分侄sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标示，treg按观察的比率起始。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，指导3天后顺利进行流式细胞会法术(CD25反染)和细胞会因侄分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同指导。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE依赖性花红(b)。(c,d) CD25依赖性花红(c)和CD134依赖性花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导之中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们得显现出的论断是，来自加速令人满意侄的转化清醒CD4+Treg在GITR理解之中给与了扩展和丰富，强调了进一步分析Treg在1改进型肾病风险个躯之中的差异性的全面性。

原文显现原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28